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带您了解医院里的病理科(三)——病理标本的前期处理(固定)

来源:安康市妇幼保健院 发布时间:2020-10-22 浏览次数:240次

  病理技术作为病理学科的支撑,是病理诊断的基础。病理技术是病理工作中的重要组成部分,它贯穿从接收标本到发放病理报告整个诊断流程的始终。病理技术工作的质量直接影响到患者的诊断治疗效果,因此高质量的病理技术工作就显得尤为重要。其中的关键是组织的处理,组织处理的好坏,直接决定了之后无论是常规HE染色还是免疫组化、原位杂交还是基因检测的可靠性和准确性。因此组织的固定显得及其重要,良好的固定是制作一张优良病理切片的先决条件,组织固定的好坏在制片操作中无法纠正,固定是组织处理最重要的一步。为什么要固定呢?固定是在组织离体后,用各种办法使其细胞内的物质尽可能的接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。

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组织固定的目的


  1. 迅速防止组织、细胞的死后变化,防止组织自溶和腐败,以保持组织和细胞与正常生活时的形态相似;

  2. 细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质,以保持它原有的结构与生活时相仿;

  3. 使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折射率,造成光学上的差异,以便染色后易于鉴别和观察;

  4. 固定剂兼有硬化作用,使组织硬化,增加组织硬度,便于制片;

  5. 防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构;

  6. 经过固定的组织,能对染料产生不同的亲和力而着色清晰,便于辨认。


固定的注意事项


  1.固定必须及时组织离体后,必须立即固定(在30分钟内)。

  2.固定液的选择固定液的选择非常重要,应该根据制作要求选择合适的固定液。最常用的固定液是4%甲醛液或4%中性缓冲甲醛液。

  3.固定液的量必须大于组织体积的4—10倍。

  4.固定液的浓度固定液的浓度必须准确,过稀或过浓都会影响组织的形态和固定效果。

  5.固定液的质量要注意固定液的有效期。发现固定液变质,如甲醛液体产生白色沉淀,应立即更换。

  6.固定的温度室温或放于35—37℃的全封闭组织处理机内。温度过高,会加快组织的自溶和组织的过度收缩,并破坏细胞内的抗原。

  7.固定的时间新鲜标本,应该剖开固定12—24小时后再取材。大标本取材后在室温下需再固定4—6小时。小标本取材后应该在室温下再固定3—4小时;如果是新鲜小标本取材,必须再固定4—8小时。如果室内温度过低,固定时间还需延长。需要做免疫组化或分子病理的标本,从标本离体至组织脱水开始,总固定时间一般不要超过48小时,但也不要少于24小时(厚度2—3m)。

  尽管固定液有好多种,但最常用的固定液为10%中性福尔马林(甲醛)。福尔马林渗透性强,固定均匀,组织收缩小,但经酒精脱水后收缩较大。甲醛不能使白蛋白和核蛋白沉淀,甲醛通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用由于10%中性福尔马林受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入水分的影响,浓度容易被降低,导致组织固定不足;而高浓度的福尔马林,降低了对组织的穿透性,形成周围固定好而中央固定不到的现象。所以可以适当增加福尔马林的浓度,以12%左右为佳。10%中性缓冲福尔马林是渗透组织最快的试剂,但也是固定最慢的试剂,因此我们要深入认识它、利用它。甲醛的作用分三个阶段,分别是渗透、结合、交联,这三个阶段甲醛的作用速度分别为快、中、慢,可见甲醛对组织的固定作用并不是与渗透同时进行的(渗透到不等于固定好),只有交联好才算固定好

  由于固定用时较长,这也是导致病理报告周期较长的原因之一。

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  固定是病理制片过程中最重要的一步,因为这是不可逆的,也就是无法补救的。由于组织固定不佳,会造成组织腐烂、抗原丢失,将影响切片质量,也将导致诊断困难或无法诊断,甚至影响免疫组化及基因检测结果准确性, 因此规范、合理的标本管理非常重要。